1. 雜質(zhì)為異構(gòu)體混合物（結(jié)構(gòu)/手性/順反異構(gòu)）

加標溶液里的雜質(zhì)，如果本身為異構(gòu)體（如順/反異構(gòu)、手性對映體，或者位置異構(gòu)體），而你的色譜分離方法對此類結(jié)構(gòu)有分離能力，就會出現(xiàn)兩個峰（即“雙峰”）。

比如雜質(zhì)A有A1和A2兩種異構(gòu)體，標準品本身即為兩種結(jié)構(gòu)的混合物，且色譜可以分開，自然呈現(xiàn)雙峰。

判斷方法：

查標準品說明書或MSDS，是否標明存在異構(gòu)體（常見于雜質(zhì)標準品或消旋體）。

查分析方法，是否為手性色譜柱、異構(gòu)體分離優(yōu)化條件。

2. 加標溶液中雜質(zhì)純度不夠，含有副成分

雜質(zhì)標準品若不夠純，含有部分降解產(chǎn)物或其它相關(guān)物質(zhì)，這些組分和主雜質(zhì)響應(yīng)值接近，保留時間相近也會導(dǎo)致雙峰。

3. 方法參數(shù)/儀器原因

色譜流動相比例、柱溫或進樣方式欠優(yōu)化時，存在峰分裂（不是兩個化學(xué)成分，而是一個組分在條件下分成兩峰）。

進樣量過大、柱頭活性點導(dǎo)致樣品部分吸附拖尾或者二次分布。

色譜柱出現(xiàn)輕微老化或污染，也會導(dǎo)致峰分裂。

4. 雜質(zhì)發(fā)生互變/變構(gòu)或基質(zhì)影響

有的雜質(zhì)如酮-烯醇互變，或者順反異構(gòu)體比例隨溶液環(huán)境變化，或樣品溶劑促使雜質(zhì)轉(zhuǎn)變，也可導(dǎo)致雙峰。

加標溶液溶劑與雜質(zhì)發(fā)生物理/化學(xué)作用，雜質(zhì)在系統(tǒng)中呈現(xiàn)不同狀態(tài)。

5. 其它特殊情況

雜質(zhì)與基體中其它物質(zhì)發(fā)生締合或弱反應(yīng)，同一雜質(zhì)以不同形式出峰。

標準品超期或儲存條件不佳產(chǎn)生分解產(chǎn)物。

加標操作不均（不同溶液間混雜導(dǎo)致）